Splet21. feb. 2024 · 若采用太高的退火温度，Tm值低的引物对可能完全不发挥作用。 在从一批在特定序列范围内已合成好的寡核苷酸中选择一对新的引物时，这种GC含量和 Tm值的协调非常关键。 一般来说，一对引物的Tm值相差尽量不超过2～3摄氏度，同时引物和产物的Tm值也不要相差太大，20摄氏度范围内较好。 ④引物的额外序列与退火温度 若有额外的序列 … SpletAlways use the default 50 mM salt concentration in the calculation. For primers ≤20 nt, use the lower T m given by the calculator for annealing. For primers >20 nt, use an annealing temperature 3°C higher than the lower T m given by the calculator. Example: If T m s given by the calculator are 66.5°C and 65.0°C, use an annealing ...

【求助】关于GC含量高的问题 - 经验共享 - 分析测试百科

Splet29. jul. 2024 · pcr反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。 PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定， … Splet05. jun. 2024 · 1、引物长度一般在15-30bp。 常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应； 2、引物GC含量一般为40%-60%， 45-55% … pn the label

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Splet09. dec. 2024 · Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) 引物为20 mer以上时： Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L 其中L为引物的长度。 在PCR反应过程中选择Annealing温度时，一般 … Splet27. avg. 2024 · 稀释标准，以最终跑板子GAPDH的Ct值不要太大为宜。 GAPDH的Ct值多大算大？ 我认为大于20就算大了，我自己通常不让它超过18。 GAPDH的Ct值过大，结果不可靠，数据会被质疑。 所以，摸索的时候， 先试试稀释1～1.5倍 ，然后根据GAPDH的Ct值来决定是否可以再多稀释一些。 【2】如何计算需要逆转录多少RNA？ 整个计算过程应该是 … Splet31. avg. 2024 · The Tm of the fwd primer is 55.6 C and that of the rev is 58.2 C. Upon performing gradient PCR, I saw bands at 50C and 53C but not at 52 and 54C. When I … pn they\\u0027d